проточная цитометрия

в аллергологии

Тест активации базофилов

Данная информация предназначена исключительно для специалистов в области здравоохранения
Пациенту следует обратиться к врачу

Тест активации базофилов - высокотехнологичный вспомогательный инструмент для диагностики лекарственной аллергии и хронической крапивницы

Роль базофилов в патогенезе аллергического ответа хорошо известна. Базофилы и тучные клетки являются ключевыми эффекторными клетками при аллергических реакциях немедленного типа. Пути активации базофилов схожи как in vivo, так и in vitro.

Тест активации базофилов не просто метод диагностики in vitro, но и ex vivo, а именно проведение эксперимента на живых клетках, перенесённых из организма человека в искусственную внешнюю среду. По сравнению с привычным определением специфического IgE в сыворотке, базофильный тест отражает именно функциональный ответ клеток.

ТЕСТ
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ОСНОВА

Тест активации базофилов (англ. basophil activation testingВАТ ) был разработан в 1990-х годах после открытия молекулы активации базофилов – CD63. Активация базофилов вызывается перекрестным связыванием тестируемого аллергена с IgE, закрепленном на высокоаффинном рецепторе (FceRI) мембраны базофилов пациента.

Плотность комплексов FceRI-IgE на базофилах и тучных клетках определяется концентрацией свободного IgE в крови.

Перекрестная попарная сшивка комплексов FceRI и IgE с аллергеном вызывает дегрануляцию и экспрессию на поверхности базофилов спектра маркеров.

Особое значение тесту придает возможность выявления активации базофилов, происходящей без участия IgE-антител. Базофилы могут активироваться за счет прямой активации, при изменении осмолярности, а также с участием комплимента.

Для диагностики в настоящий момент могут использоваться два маркера – CD63 или CD203c.

Иллюстрация:
Oliver V.Hausmann et al. The Basophil Activation Test in Immediate-Type Drug Allergy. Immunology and Allergy Clinics of North America. Volume 29, Issue 3, August 2009, page 556

Помимо CD63 идентифицирован ряд других маркеров активации, среди них CD203c. По некоторым данным CD203c, по-видимому, коэкспрессируется с CD63, но пути их активации различаются. В соответствии с согласительным документом EAACI, посвященном применению ВАТ в диагностике аллергических заболеваний, тест активации с CD63 является лучшим клинически подтвержденным тестом. Однако тест на основе CD203c также демонстрирует свою надежность и широко применяется. Существуют диагностические наборы как с CD63, так и с CD203c, а также набор, включающий в себя оба маркера.

Таким образом, для выявления активации базофилов в настоящий момент могут использоваться два маркера – CD63 или CD203c.

ОСНОВЫ
ПРЕАНАЛИТИКА
В тесте активации базофилов биоматериалом является цельная кровь. Для взятия крови
могут использоваться пробирки с двумя типами антикоагулянтов – ЭДТА или литий гепарин.
  • ЭДТА сорбирует ионы, в том числе ионы кальция, поэтому базофилы цельной крови, собранные в пробирку с данным антикоагулянтом, теряют свою способность к дегрануляции до момента внесения на преаналитическом этапе буферного раствора кальция (Са²⁺). Таким образом, базофилы остаются стабильны с момента взятия крови до непосредственно момента проведения исследования.
  • Биоматериал, собранный в пробирку с литий гепарином, не требует на этапе преаналитики добавления ионизированного кальция, однако базофилы сохраняют свою способность к спонтанной дегрануляции от момента взятия крови до проведения исследования. Это может приводить к повышению уровня фоновой активации клеток, особенно при позднем взятии биоматериала в работу.
При заборе крови в несколько пробирок, кровь для BAT берется в первую очередь (минимизация воздействия жгута).
Для предотвращения контаминации аллергенами до и во время стимуляции аллергеном пробирки с образцами и окна в лабораторном помещении должны быть закрыты.
Во время проведения данного исследования не используются латексные перчатки.
УСЛОВИЯ
ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВКА
Временной предел использования биоматериала зависит от типа используемой пробирки и температурного режима хранения крови.
Несмотря на то что базофилы, собранные в пробирку с литий гепарином сохраняют свою способность к активации в течение суток, традиционно такой биоматериал берется в работу не позднее 4-х часов, так как в дальнейшем происходит снижение их реактивности и повышение фоновой (спонтанной) активации.
Кровь в пробирке с ЭДТА хранится дольше – для определения реактивности базофилов с белковыми аллергенами - до 48 часов, с лекарственными – до 24 часов.
2-8°С является оптимальной температурой транспортировки и хранения биоматериала для теста активации базофилов.
Пробоподготовка: отрицательный контроль, положительный контроль, внесение аллергена. Именно эти данные будут отражены в результате.
Исследование образца крови одного пациента с одним аллергеном представляет собой анализ на проточном цитометре трех пробирок – отрицательный контроль, положительный контроль и проба с аллергеном.
тест активации базофилов с 1 аллергеном
Отрицательным (негативным) контролем является порция крови, которая окрашена стандартным коктейлем антител в присутствии только полифосфатного буферного раствора (PBS). Именно в этой пробе оценивается фоновый (он же базальный, спонтанный) уровень активации базофилов.
В качестве положительного (позитивного) контроля используются стандартные антитела к FceRI, которые вызывают активацию базофилов.
При необходимости постановки теста с несколькими аллергенами - добавляется соответствующее количество пробирок.
Тест активации базофилов с 3 аллергенами
Реактивность - количество базофилов, которые ответили на определенный стимул (количество активированных базофилов). Измеряется с одной или двумя концентрациями аллергена. Единицы измерения реактивности - %
Также реактивность выражается с помощью индекса активации (ИА), который отражает уровень активированных базофилов в пробе с аллергеном относительно фоновой пробы.
Результат исследования
Референсные значения устанавливаются каждой лабораторией на основании этапа отработки теста. Это нормальное явление для функциональных исследований
Пример результата BAT
ЦКТ "Покровский"
Санкт-Петербург
ПРИМЕНЕНИЕ
В КЛИНИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ
Тест активации базофилов может использоваться в клинической практике в следующих случаях:
  • Диагностика лекарственной гиперчувствительности;
  • Диагностика с некоторыми пищевыми аллергенами, для которых известно, что аллергические реакции к ним недостаточно успешно выявляются с помощью определения специфических IgE и при интестинальных проявлениях пищевой аллергии;
  • Диагностика аутоиммунной крапивницы.
Рассматривается применение данного теста для оценки эффективности аллерген-специфической иммунотерапии и при оценке ответа на омализумаб.
ТЕСТ
ПОДГОТОВКА ПАЦИЕНТА
Прием антигистаминных препаратов и топических стероидов не влияет результаты теста активации базофилов.
Системные глюкокортикостероиды должны быть исключены за 3 недели до взятия биоматериала, а также циклоспорин А и такролимус.
Кровь сдается утром, натощак.
ТЕСТ

АКТИВАЦИИ БАЗОФИЛОВ ЛЕКАРСТВЕННЫМ АЛЛЕРГЕНОМ

Диагностическое исследование гиперчувствительности к лекарственным аллергенам направлено на выявление причинно-значимого аллергена и определение безопасного альтернативного препарата.
Это особенно важно при диагностике аллергии на препараты, используемые для общей анестезии (наркоз), когда провокационное тестирование невозможно, непрактично или неэтично.
Тест активации базофилов имеет хорошую прогностическую ценность отрицательного результата, полезен при принятии решения о проведении провокационного теста.
Базофильный тест высоко значим для диагностики лекарственной гиперчувствительности к препаратам, для которых отсутствуют другие in vitro тесты, а кожные пробы недоступны, ненадежны или дают неоднозначные результаты.
Патогенез не IgE-опосредованных анафилактических реакций на лекарственные препараты изучен не до конца. Эти реакции могут быть следствием прямой активации эффекторных клеток или активации с участием комплимента, а также изменения осмолярности, что встречается при применении рентгеноконтрастных препаратов и препаратов для общей анестезии. Такие реакции могут быть смоделированы и выявлены именно с помощью теста активации базофилов.
Использование BAT с лекарственными аллергенами целесообразно при подозрении на IgE-опосредованную или не IgE-опосредованную анафилактическую реакцию. Бессмысленно использовать тест для диагностики состояний с признаками других видов гиперчувствительности (нет подозрения на участие базофилов/тучных клеток в патологическом процессе).
BAT
ВЫБОР ЛЕКАРСТВЕННОГО АЛЛЕРГЕНА
В стандартном, применяемом в клинической практике, тесте следует использовать аллерген в форме раствора.
Рабочая концентрация аллергена может определяться лабораторией на основании тестирования биоматериала здоровых доноров. Для некоторых лекарственных аллергенов разведение диагностического аллергена указано в Приложении к согласительному документу EAACI по клиническому применению теста активации базофилов от 2015 года.

Возможность проведения исследования с иными формами ЛС (таблетки, капсулы, свечи, сиропы), а также со стоматологическими материалами (металлы, акрилаты и пр.) вызывает разногласия и подлежит обсуждению. Инкубация вышеуказанных ЛС и материалов 24 часа в термостате в физиологическом растворе и последующий забор надосадочной жидкости в качестве аллергена для исследования, оставляет резонный вопрос - что именно и в какой концентрации содержится в этой жидкости? Насколько этот раствор по составу эквивалентен исходному лекарственному средству или стоматологическому материалу?
Методические рекомендации по диагностике лекарственной аллергии, 2022
Раздел тесты in vitro. Группа тестов №2, которые применяются для выявления ЛП-аллергена
упоминание BAT в регламентирующих документах (РФ)
- Тест активации базофилов. Чувствительность теста варьирует в широких пределах в зависимости от причинно-значимого ЛП, специфичность метода высокая (например, препараты пенициллинового ряда: чувствительность 22-55%, специфичность 79-96%; нервно-мышечные релаксанты: чувствительность 64-85,7%, специфичность 93-100%). Доступны сертифицированные тесты.
ТЕСТ

АКТИВАЦИЯ БАЗОФИЛОВ ДОНОРА СЫВОРОТКОЙ БОЛЬНОГО КРАПИВНИЦЕЙ

Объемная и интересная тема, которая вполне достойна отдельного внимания.
Скоро здесь будет ссылка на обзор по использованию модификации теста активации базофилов для диагностики аутоиммунного варианта хронической крапивницы

Выполнить тест активации базофилов в Санкт-Петербурге
  • срок исполнения 2 рабочих дня
    г. Санкт-Петербург,
    Большой проспект В. О., 85
    Запись на тест по телефону +7 (812) 336-51-08
    Перейти на сайт
Связаться по электронной почте:

Я не пользуюсь чат-ботами

Отвечу обязательно, но не мгновенно

Персональные данные

© 2025 Все права защищены
allergy-spb.ru
Made on
Tilda